محیط کشت RPMI-1640 سیگما آلدریچ ۵۰۰ میلی‌لیتر کد R8758

محیط کشت RPMI-1640 چیست؟

RPMI-1640 مخفف Roswell Park Memorial Institute 1640 Medium است. این محیط کشت در ابتدا برای حمایت از رشد سلول‌های لنفوبلاستوئیدی در کشت سوسپانسیون طراحی شد، اما بعدها مشخص شد که برای طیف گسترده‌ای از سلول‌های پستانداران، از جمله برخی سلول‌های وابسته به سطح، نیز قابل استفاده است. Sigma-Aldrich کاربرد آن رابه‌طور مشخص در کشت لکوسیت‌های طبیعی و نئوپلاستیک انسانی و انواع خطوط سلولی ذکر می‌کند

محیط R8758 نسخه مایع و آماده مصرف RPMI-1640 است و برخلاف بعضی فرمولاسیون‌های دیگر RPMI، از قبل دارای ال-گلوتامین و سدیم بی‌کربنات است. همچنین این نسخه حاوی فنول رد بوده، اما HEPES و سدیم پیرووات در فرمول آن وجود ندارند.

ویژگی مهم این مدل

یکی از نکات مهم هنگام خرید RPMI توجه به تفاوت فرمولاسیون‌هاست. محصول R8758 دقیقاً دارای مشخصات زیر است:

حاوی ال-گلوتامین: بله
حاوی سدیم بی‌کربنات: بله
حاوی فنول رد: بله
حاوی HEPES: خیر
حاوی سدیم پیرووات: خیر
فرم: مایع
استریل: استریل‌فیلترشده
مناسب کشت سلول‌های پستانداران: بله
بررسی اندوتوکسین: انجام شده است.

این تفاوت‌ها مهم هستند، چون Sigma-Aldrich چندین نوع RPMI-1640 با ترکیبات متفاوت عرضه می‌کند؛ برای مثال برخی مدل‌ها فاقد گلوتامین یا دارای HEPES هستند.

ترکیبات مهم RPMI-1640 R8758

طبق جدول فرمولاسیون رسمی Sigma-Aldrich، محصول R8758 در هر لیتر دارای ۲ گرم D-Glucose، ۲ گرم سدیم بی‌کربنات، ۰٫۳ گرم L-Glutamine و ۰٫0053 گرم Phenol Red Sodium Salt است. این محیط همچنین شامل مجموعه‌ای از نمک‌های معدنی، اسیدهای آمینه و ویتامین‌هاست.

از جمله ترکیبات آن می‌توان به آرژینین، آسپاراژین، آسپارتیک اسید، سیستین، گلوتامیک اسید، گلایسین، هیستیدین، ایزولوسین، لوسین، لیزین، متیونین، فنیل‌آلانین، پرولین، سرین، ترئونین، تریپتوفان، تیروزین و والین اشاره کرد.

فرمول همچنین حاوی ویتامین‌هایی نظیر بیوتین، کولین کلراید، فولیک اسید، اینوزیتول، نیاسینامید، پانتوتنیک اسید، پیریدوکسین، ریبوفلاوین، تیامین و ویتامین B12 است.

کاربردهای محیط کشت RPMI-1640

محیط RPMI-1640 یکی از محیط‌های پایه پرکاربرد در تحقیقات کشت سلولی است و برای نگهداری و رشد انواع سلول‌های پستانداران استفاده می‌شود. این محیط به‌طور تاریخی برای سلول‌های خونساز و لنفوسیتی توسعه یافته و در مطالعات مربوط به لکوسیت‌های انسانی، سلول‌های لنفوئیدی، هیبریدها و بسیاری از خطوط سلولی کاربرد دارد.

کاربردهای متداول آن شامل کشت سلول‌های پستانداران، تحقیقات سرطان، ایمونولوژی، مطالعات سلول‌های خونی، نگهداری خطوط سلولی و آزمایش‌های زیست‌شناسی سلولی است. در منابع داخلی ایران نیز RPMI-1640 به‌عنوان یکی از محیط‌های متداول کشت سلولی معرفی شده است.

آیا این محصول نیاز به افزودن FBS دارد؟

RPMI-1640 یک محیط پایه محسوب می‌شود. نوع و مقدار مکمل‌هایی مانند FBS، آنتی‌بیوتیک‌ها یا سایر مکمل‌ها باید با توجه به نوع سلول و پروتکل آزمایش تعیین شود. در بسیاری از پروتکل‌های رایج RPMI با سرم تکمیل می‌شود، اما درصد سرم یک عدد ثابت برای همه سلول‌ها نیست و باید بر اساس پروتکل همان رده سلولی تعیین شود.

آیا لازم است به R8758 گلوتامین اضافه شود؟

در حالت معمول خیر، زیرا R8758 از قبل حاوی L-Glutamine با غلظت ۰٫۳ گرم در لیتر است. بنابراین نباید آن را با انواع RPMI فاقد گلوتامین اشتباه گرفت.

آیا R8758 حاوی HEPES است؟

خیر. Sigma-Aldrich به‌طور مشخص اعلام می‌کند که R8758 فاقد HEPES است و سیستم بافری اصلی آن بر پایه بی‌کربنات است. شرکت برای کاربرانی که به RPMI حاوی HEPES نیاز دارند، فرمولاسیون‌های دیگری ارائه می‌کند.

آیا R8758 حاوی فنول رد است؟

بله. این محصول حاوی Phenol Red است؛ جدول رسمی فرمولاسیون مقدار آن را به‌صورت نمک سدیمی فنول رد حدود ۰٫0053 گرم در لیتر ذکر می‌کند.

آیا محیط کشت را می‌توان فریز کرد؟

Sigma-Aldrich فریز کردن محیط‌های کشت سلولی آماده را توصیه نمی‌کند. طبق پاسخ فنی شرکت، یخ‌زدایی می‌تواند موجب ایجاد رسوب و کاهش برخی اسیدهای آمینه شود و در نتیجه عملکرد محیط در رشد سلولی را تحت تأثیر قرار دهد. بنابراین R8758 بهتر است مطابق دستور سازنده در ۲ تا ۸ درجه سانتی‌گراد نگهداری شود.

نکات ایمنی

طبق SDS رسمی Sigma-Aldrich، محصول R8758 در طبقه‌بندی GHS به‌عنوان ماده یا مخلوط خطرناک طبقه‌بندی نشده و برای آن پیکتوگرام خطر، Signal Word یا Hazard Statement الزامی اعلام نشده است. با این حال، رعایت اصول استاندارد کار آزمایشگاهی و استفاده از تجهیزات حفاظت فردی متناسب با کار توصیه می‌شود.