محلول تریپسین EDTA سیگما ۰.۲۵٪ کد T4049 حجم ۱۰۰ میلی‌لیتر

محلول Trypsin-EDTA Solution 0.25% Sigma-Aldrich T4049 یکی از معرف‌های پرکاربرد در آزمایشگاه‌های کشت سلول است که عمدتاً برای جدا کردن سلول‌های چسبنده از سطح فلاسک، پلیت و سایر ظروف کشت سلولی استفاده می‌شود.

تریپسین یک آنزیم پروتئولیتیک از خانواده سرین پروتئازها است. در محصول T4049، تریپسین با منشأ خوکی با غلظت ۲.۵ گرم در لیتر معادل ۰.۲۵٪ به همراه ۰.۲ گرم در لیتر EDTA چهار سدیمی در محلول HBSS عرضه می‌شود. محلول همچنین حاوی Phenol Red بوده و به‌صورت 1X و Cell Culture Tested تهیه شده است.

عملکرد تریپسین و EDTA

تریپسین پیوندهای پپتیدی را عمدتاً در سمت کربوکسیلی اسیدهای آمینه لیزین و آرژینین هیدرولیز می‌کند. EDTA نیز با شلاته کردن یون‌های کلسیم و منیزیم، اتصالات وابسته به این یون‌ها را کاهش داده و به عملکرد مؤثرتر تریپسین در جداسازی سلول‌ها کمک می‌کند. محدوده مطلوب فعالیت تریپسین تقریباً pH ۷ تا ۹ گزارش شده است.

به همین دلیل ترکیب Trypsin و EDTA برای جدا کردن سلول‌های چسبنده از سطح ظروف کشت و نیز جدا کردن سلول‌ها از یکدیگر بسیار متداول است.

کاربردهای محلول تریپسین EDTA T4049

طبق اطلاعات رسمی Sigma-Aldrich، این محصول برای کشت سلول‌های پستانداران و Single Cell Analysis مناسب است. از کاربردهای گزارش‌شده برای T4049 می‌توان به جداسازی سلول‌های چسبنده از ظروف کشت، تریپسینایز کردن سلول‌ها در فرآیند پاساژ، جداسازی سلول‌ها برای فلوسایتومتری و تهیه سوسپانسیون تک‌سلولی برای برخی کاربردهای توالی‌یابی اشاره کرد. Sigma همچنین استفاده پژوهشی از آن را برای سلول‌های HT29، سلول‌های tcA-201 و فیبروبلاست‌های L929 گزارش کرده است.

شرایط نگهداری

محلول Trypsin-EDTA T4049 باید به‌صورت منجمد و ترجیحاً در دمای ۲۰- درجه سانتی‌گراد نگهداری شود. از چرخه‌های مکرر انجماد و ذوب شدن محصول جلوگیری شود.

نکته مهم درباره رنگ محلول

وجود Phenol Red ممکن است باعث شود محلول به رنگ صورتی یا نارنجی دیده شود. Sigma توضیح داده است که در اثر CO₂ ناشی از حمل روی یخ خشک، pH ممکن است کمی کاهش یابد و رنگ محلول از صورتی به سمت نارنجی تغییر کند؛ این تغییر رنگ به‌تنهایی الزاماً به معنی غیرقابل‌استفاده بودن محصول نیست.

نکات استفاده آزمایشگاهی

غلظت و زمان تماس تریپسین با سلول‌ها باید متناسب با نوع سلول و شرایط کشت تنظیم شود. استفاده از غلظت بالا یا تماس طولانی‌مدت با تریپسین می‌تواند به غشای سلولی آسیب رسانده و حتی باعث مرگ سلول شود. خود Sigma نیز تأکید می‌کند که زمان و غلظت لازم برای جدا کردن سلول‌ها بر اساس Cell Type و سن کشت متفاوت است.

این محصول برای مصارف آزمایشگاهی و تحقیقاتی عرضه شده است و نباید به‌عنوان محصول دارویی یا مصرف خانگی مصرف شود.

هشدار: فقط برای مصارف آزمایشگاهی و تحقیقاتی. هنگام کار از تجهیزات حفاظت فردی مناسب استفاده شود و از ایجاد یا استنشاق آئروسل محلول جلوگیری گردد.